产品货号:
GS0110
中文名称:
磁珠法深加工产品DNA提取试剂盒
英文名称:
Mag-BB Food gDNA Extraction Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒是专门用于深加工产品基因组DNA提取的试剂盒,深加工产品经过煮、煎、炸、腌制和发酵等数道工序制备而成,其原材料经过高温,机械损伤和极端环境(强酸强碱等)处理,基因组DNA严重断裂和降,因此从深加工产品中抽提基因组DNA存在一定的困难。本试剂盒将经典的CTAB裂解法和生物纳米磁分离技术相结合,CTAB裂解法保证深加工产品充分裂解,释放出其中的基因组DNA,然后通过一系列的处理将其中的杂质清除,得到的上清液中的基因组DNA采用生物纳米磁珠吸附,然后通过磁珠-DNA复合物的洗涤过程,清除吸附的杂质,最后在最佳的洗脱条件下获得基因组DNA。与市售的同类产品相比,本试剂盒最大特点是SgMag Beads替代硅胶膜柱,SgMag Beads能够特异性吸附裂解液中的基因组DNA,具有吸附效率高,吸附速度快等优势。另外,本试剂盒可以与核酸自动提取仪相结合,实现深加工产品基因组DNA提取的自动化和高通量化。采用本试剂盒所得到的基因组DNA质量高,可直接用于后续的real time qPCR检测。
- 通用型深加工产品基因组DNA提取试剂盒,适用于各种深加工食品材料。
- SgMag beads代替硅胶膜柱,吸附效率高,吸附速度快。
- 与传统柱式法相比,获得基因组DNA产量高。
- 可以微量体积洗脱,提高基因组DNA的浓度,便于下游实验。
- 与核酸自动提取仪配合使用,实现深加工产品的基因组DNA提取的高通量化和半自动化。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer GMO | 60mL | 120mL |
Buffer GMP | 60mL | 120mL |
Buffer DRL | 20mL | 40mL |
SgMag Beads | 1.5mL | 3mL |
Buffer MA | 25mL | 50mL |
Proteinase K | 1.2mL | 2.4mL |
TE Buffer(pH8.0) | 10mL | 20mL |
保存:室温
Buffer GMO和Buffer GMP中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:磁力架、水浴锅、离心机、2mL离心管和70%乙醇。
- 请提前将水浴锅调至65℃备用。
- 样品处理
- 固态产品:取足量的固态食品,液氮或者机械研磨至粉末,称取100~200mg的食品粉末至2mL离心管中。
- 豆浆等液态产品:取20mL液态食品于50mL离心管中,12000rpm离心10min,弃上清。
- 加工处理的干燥植物组织及中草药:称取经液氮研磨的100~300mg干燥的植物组织或者中草药粉末至2mL离心管中。
- 固态产品:取足量的固态食品,液氮或者机械研磨至粉末,称取100~200mg的食品粉末至2mL离心管中。
- 向上述含有生物材料的离心管中加入1mL GMO Buffer和20μL proteinase K,充分振荡混匀,65℃水浴30min,间或振荡混匀。
- 依据食品材料的体积和大小,可以适量调节GMO Buffer的加量,食品材料需要完全浸没在GMO buffer中才能保证充分裂解。
- 如果需要获得无RNA污染的基因组DNA,需要同时加入20μL 10mg/mL RNase A。
- 依据食品材料的体积和大小,可以适量调节GMO Buffer的加量,食品材料需要完全浸没在GMO buffer中才能保证充分裂解。
- 12000rpm离心10min,吸取全部上清至一个新的2mL离心管中。
- 向上清中加入400μL氯仿,充分混匀,12000rpm离心10min,转移上清至新的离心管中。
- 向上清中加入2倍体积的GMP Buffer,充分混匀,12000rpm离心5min,弃上清。
- 如果需要提高基因组DNA的得率,可以加入GMP buffer充分混匀之后放置5~10min。
- 弃上清时请勿吸到沉淀,否则影响最后基因组的得率。
- 如果需要提高基因组DNA的得率,可以加入GMP buffer充分混匀之后放置5~10min。
- 向沉淀中加入350μL DRL Buffer,充分悬浮沉淀物。
- 向上述溶液中加入350μL MA Buffer和25μL SgMag Beads,充分混匀,室温放置3min,间或混匀。
- 吸取SgMag Beads之前,请将其充分漩涡混匀。
- 将离心管置于磁力架上1min,待SgMag Beads完全吸至管壁上之后,吸弃上清,从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量SgMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
- 吸弃上清时请勿吸入SgMag Beads,尽量吸净上清。
- 从磁力架上取出离心管后,若有少量上清,请将离心管置于磁力架上,再次吸取上清。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量SgMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
- 向离心管中加入700μL 70%乙醇,振荡混匀10 s,将离心管置于磁力架上1min,待SgMag Beads完全吸至管壁上之后,吸弃上清,从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量SgMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入SgMag Beads,尽量吸净上清。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量SgMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
- 重复步骤9一次,室温开盖干燥15min或者55℃恒温箱中开盖干燥5min至管内无液体残留。
- 干燥前,请尽量吸净管内的液体。
- 干燥前,若出现液体挂壁现象,可将离心管短暂离心之后,再将其置于磁力架上,待所有SgMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内的液体。
- 干燥前,请尽量吸净管内的液体。
- 加入30~50μL TE Buffer (pH8.0),65℃水浴5min,间或混匀。
- 水浴之后可将离心管短暂离心,然后再进行第12步。
- 请将管壁上所有SgMag Beads完全悬浮在TE Buffer中。
- 水浴之后可将离心管短暂离心,然后再进行第12步。
- 取出离心管并置于磁力架上1min,待SgMag Beads完全吸至管壁上之后,小心吸取上清至新的离心管,即获得基因组DNA。
- 吸取上清前,请确保SgMag Beads完全吸至管壁,请勿吸入SgMag Beads,否则影响产物纯度。
- 若洗脱步骤采用水浴,可以短暂离心之后再取上清。
- 吸取上清前,请确保SgMag Beads完全吸至管壁,请勿吸入SgMag Beads,否则影响产物纯度。
- 得率低
- 取样量太少。不同的食品材料含有的基因组DNA千差万别,如果需要可以在说明书给定的范围做各食品材料起始量的梯度,获取最佳的材料用量。
- 样品裂解不充分。对于固态食品材料,需要将其充分研磨成粉末之后加入裂解液,裂解期间间或混匀,保证裂解充分;液体食品材料需要高速离心取沉淀,然后再加入裂解液,离心机转速一定要在10000rpm以上。
- 结合不充分。加入Buffer MA和SgMag Beads之后,请将其充分混匀,并使SgMag Beads处于悬浮状态。
- 操作过程中丢失SgMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的SgMag Beads粘在离心管管口上,吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口,使粘在管口的SgMag Beads也吸附在管壁上。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值> 7.5,pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有SgMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5~10min,常温条件下SgMag Beads只能释放少量的基因组DNA,65℃条件下SgMag Beads与基因组DNA的作用力减弱,磁珠释放出大量的基因组DNA。
- 取样量太少。不同的食品材料含有的基因组DNA千差万别,如果需要可以在说明书给定的范围做各食品材料起始量的梯度,获取最佳的材料用量。
- 获得的DNA条带弥散或者电泳没有可见条带
- 食品材料都是经过深加工处理,其原材料中的DNA已经断裂降解,电泳获得DNA条带弥散属于正常现象;另外,一些DNA含量极少的食品材料,电泳条带不可见,需要后续real time qPCR验证才能知道是否获得目标DNA。
- 获得的DNA粘稠不纯
- 诸如淀粉类食品材料如面粉,饼干等,这些食品材料中淀粉含量丰富,所以处理过中需要严格按照说明书进行,离心力一定达到说明书要求,吸取上清时要彻底。
- DNA样品不纯,抑制或者干扰后续实验
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管,放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s,吸净管底的液体。
若出现残液有不同程度的挂壁现象,请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30s,吸净离心管管底的液体。 - 若初始材料取样太多也会造成DNA纯度不行。食品材料一定按照说明书要求进行。
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管,放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s,吸净管底的液体。
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